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支原体检测

 细胞鉴定     |      2020-12-27

支原体检测
在细胞培养过程中,支原体感染的情况常有发生。当细胞(特别是传代细胞)被支原体污染后,细胞内的DNA、RNA及蛋白表达会发生改变,而细胞的生长率通常并未发生显著的影响,因此细胞被支原体污染一般难以察觉。美德华生使用支原体特异性引物扩增细胞培养样本,与含有支原体的阳性标准品和不含有支原体的阴性标准品比对,便可知道细胞样本中是否含有支原体。除此之外,还可以根据扩增产物的片段大小判断污染细胞的支原体的种类。

PCR法检测的支原体

13种支原体大约占污染细胞的支原体种类的99%左右,因此PCR能达到99%;
+恒温法则能达到99.9%。

华科鉴联基因可以提供PCR法+恒温法支原体检测。暂不提供培养法支原体检测。

《PCR法支原体检测试剂盒》可用于检测一切可能含支原体的样品,比如:

(1)体外细胞培养的上清;
(2)血清;
(3)各种体液,如唾液、尿液、鼻腔分泌物等;
(4)别的液体样品。本产品仅供研究使用。
产品简介
    哺乳动物细胞的培养,支原体(Mycoplasma)污染是个世界性的问题。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数,导致实验结果的不准确、甚至完全错误(支原体污染对细胞的详细危害,请参考本公司的网站:www.yisemed.com)。从2013年开始,《Nature》期刊已正式要求投稿的文章,如涉及细胞培养都要进行支原体检测。相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。
    培养法是相对可靠的支原体检测技术,但是该方法非常耗时的,需要数周,不适合作为细胞培养液中支原体污染的快速检测。此外,通过固体培养法无法检测污染细胞的一种最常见的支原体,即猪鼻支原体(M.Hyorhinis)。这是因为猪鼻支原体无法在支原体固体培养基上形成可见的菌落。而猪鼻支原体约占所有支原体污染的20-50%。
    有的实验室使用荧光染色法检测支原体,但是该方法灵敏度太低,当检测成阳性时,细胞经常已经严重污染。
    本公司已经开发出了专用于体外细胞培养的《一步法恒温支原体检测试剂盒》,与PCR法支原体检测相比,其具有许多优点:耗时短、灵敏度高、操作简单、不会被细胞代谢产物抑制、结果无需电泳肉眼可直接判断等。
    尽管如此,《一步法恒温支原体检测试剂盒》可能也有个小缺点:因为《一步法恒温支原体检测试剂盒》需要至少同时使用4条引物才能完成扩增,其引物设计相对困难。虽然经我们测试,该试剂盒至少可认识其说明书中列举的13种支原体,而这13种支原体大约占污染细胞的支原体种类的99%左右。但是,不排除《一步法恒温支原体检测试剂盒》无法识别个别在体外细胞培养中出现概率极低的支原体。为此,我们特意开发了具有广谱识别能力的《PCR法支原体检测试剂盒》。

    经测试,本公司开发的《PCR法支原体检测试剂盒》至少可以识别在体外细胞培养中曾经报道出现的20种支原体,根据文献报道,这些支原体基本上占污染细胞的支原体种类的100%。具体如下:(1)M. hyorhinis、(2)M. fermentans、(3)M. arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M. bovis、(11)  M. bovoculi、(12)Acholeplasma axanthum、(13)M. buccale、 (14) M. pneumoniae、(15)M. arthritidis、(16)M. pulmonis、(17)M. gallisepticum、(18)M. gallinarum、(19)M. canis、(20)Ureaplasma urealyticum(注:M.为Mycoplasma的缩写)。
如果客户发现除上述20种支原体外,还有其他的支原体也会污染体外培养的细胞,或者客户纯粹就是想检测其他的支原体,请告诉我们支原体的名称,我们将进行序列比对,然后告诉你本试剂是否可以识别。此外,根据支原体DNA的序列,本试剂盒可以识别100多种至今已发现的支原体,具有广谱的识别能力。
 
    此外,作为支原体检测领域的共识,单独使用任何一种支原体检测方法,都无法做到100%正确,既不会漏检(假阴性),也不会多检(假阳性)。严格的支原体检测,至少需要使用两种(最好使用三种)不同原理的支原体检测方法同时进行检测,才能使检测结果接近100%正确。
 
    如果您想得到100%正确的支原体检测结果(比如,开展细胞治疗的客户,进行干细胞培养的客户,生产血清、胰酶、培养液的客户,出售各种原代培养细胞系和肿瘤细胞系的客户等),任选本公司生产的《一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》和《发光法支原体检测试剂盒》中的两种进行检测,将会得到比较满意的结果,检测的正确率应该在99.9%以上。如果同时使用这三种试剂盒进行检测,检测的正确率应该在99.99%以上。